Recherche Agronomique
Volume 2, Numéro 3, Pages 19-44
1998-12-03
Identification Et Caractérisation D'une Protéine Recombinante P-galactosidase/est.r1 Codant Pour Un Antigène De Sporozoïte D'eimeria Stiedae (coccidiose De Lapin)
Auteurs : Tazka H . Revets H . Hamers R .
Résumé
La coccidiose est une maladie d'une importance économique majeure chez le lapin pour le développement d'un vaccin par la technique du génie-génétique dirigé contre les coccidies. Une banque d'ADN génomique d'Eimeria stiedae a été construite dans le vecteur d'expression ÂgtIL Le criblage de la banque avec un antisérum de lapin dirigé contre les sporozoïtes d'E.stiedae a identifié les recom¬binants exprimants des antigènes d'E.stiedae. Sur 3 clones recombinants identifiés, un clone (Est. RI) positif a été choisi pour une analyse plus approfondie. Ce clone génomique contient un insert/EcoRI de 1200 pb. La séquence de ce fragment a décelé une phase ouverte de lecture de 741 nucléotides qui débute à partir du site EcoRI et correspondant à une protéine de poids moléculaire de 27.5 Kd. L'antisérwn dirigé contre la protéine de fusion 13-galactosidase reconnaît une pro¬téine de 40 Kd, sur des extraits d'antigènes d'oocystes sporulés et non sporulés d'Estiedae, et sur des oocystes sporulés d'Eimeria magna et d'Eimeria intestinalis. Une protéine de plus haut poids moléculaire (45Kd) est détectée chez Eimeria tenella (parasite du poulet). L'analyse de l'inumzofluorescence indirecte a montré que cet antigène est localisé dans la région membranaire interne du sporozoïte E.stiedae et au niveau du corps réfringent chez Eanagna et E.intestinalis. L'analyse de la séquence incomplète n'a révélé aucune homologie avec les séquences existantes dans les banques de données (Swiss-Prot, PC/gene et GCG .software ).
Mots clés
Eimeria, sporozoite, banque génomique, antigène, vaccin génie-géné¬tique.
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