Recherche Agronomique
Volume 5, Numéro 9, Pages 75-90
2001-12-09
Isolement, Purification Et Caractérisation De L'a-amylase De Levures Isolées à Partir De Pomme De Terre
Auteurs : Bessalem S. . Laraba-djebari F. . Bellal3 M. .
Résumé
: Quatre souches de levures, Candida tropicalis (Ct1, Ct2 et Ct3) et Candida guillier-rnondii (Cg) ont été isolées pour leur activité a-amylasique (1,4- a-D-glucan glucanhydrolase, EC 3.2.1.1) à partir de la pomme de terre. Après avoir étudié les cinétiques de croissance, la localisation de l'a-amylase et le système de régulation des quatre différentes souches, la souche Candida tropicalis (Ct1) est considérée comme la meilleure productrice d'a-amylase. L'activité a-ami/basique de la souche Candida tropicalis Ct1 a été isolée et purifiée par précipi- tation au sulfate d'ammonium et différentes chromatographies (filtration moléculaire et échangeuse d'ions). L'analyse électrophorètique de cette enzyme révèle une homogénéité de la protéine sur gel de polyacrylamide SDS-PAGE. Cette protéine présente une masse molécu¬laire de 67 500 ± 500 Da. L'étude cinétique de cette activité révèle un pH optimal de 5,6 et une température optimale de 40°C. L'enzyme reste stable dans la gamme de pH 4,6 à 7,2 et perd totalement son activité à 60°C après 15 minutes d'incubation. L'a-amylase peut être conservée à 4°C pendant 7 jours mais pas au-delà.
Mots clés
Isolement, Levures amylolytiques, Candida guilliermondii Candida tropicalis, a-amylase, Production, Purification, Caractérisation.
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