algerian journal of environmental science and technology
Volume 2, Numéro 2, Pages 34-40
2016-08-30

Comparaison De L’expression Homologue Du Gène Vip3aa16 ‎chez Bacillus Thuringiensis Sous Le Contrôle De Différents ‎promoteurs ‎



Auteurs : Sellami S . Cherif M . Abdelkefi-mesrati L . Tounsi S . Jamoussi K .

Résumé

Bacillus thuringiensis synthétise au cours de la phase végétative, ‎les protéines de types Vip3 actifs sur les lépidoptères. Au cours ‎de ce travail, nous avons cloné le gène vip3Aa16 sous le contrôle ‎de différents promoteurs au vue de comparer l’expression et de ‎chercher à l’améliorer. En effet, vip3Aa16 a été cloné sous le ‎contrôle de trois promoteurs à la fois (les deux promoteurs ‎sporulation-dépendants spo et le promoteur végétatif Prv) (pHT-‎spo-Prv-vip3Aa16). Nous avons également cloné vip3Aa16 ‎uniquement sous le contrôle de son promoteur végétatif Prv ‎‎(pHT-Prv-vip3Aa16). L’analyse par Western blot a montré la ‎détection de Vip3Aa16 pendant la phase végétative mais non pas ‎durant la phase de sporulation, témoignant l’expression de ‎vip3Aa16 à partir de Prv et la faible ou l’absence d’expression à ‎partir des promoteurs spo. Les tests de toxicité contre les larves ‎d’Ephestia kuehniella a révélé que le surnageant des cultures des ‎souches BUPM106 (pHT-Prv-vip3Aa16) et BUPM106 (pHT-spo-‎Prv-vip3Aa16) étaient toxiques et ont causé une mortalité de ‎l’ordre de 30 % au bout de 5 jours.‎ Bacillus thuringiensis produces the vip3 genes during the ‎vegetative growth phase which are active against lepidopteran ‎larvae. During this study, the vip3Aa16 was cloned under the ‎control of different promotors in order to compare its expression ‎and try to improve it. In fact, vip3Aa16 was cloned under the ‎control of 3 promotors in the same time (the spo promotors and ‎the vegetative promotor Prv) (pHT-spo-Prv-vip3Aa16). The ‎vip3Aa16 was also cloned under the control of only the ‎vegetative promotor Prv (pHT-Prv-vip3Aa16).Western blot ‎analyses showed that Vip3Aa16 protein was detected during the ‎vegetative phase but not during the sporulation phase, proving ‎the expression of vip3Aa16 from the Prv and not from the spo ‎promotors. Bioassays against Ephestia kuehniella revealed that ‎the supernatant of BUPM106 (pHT-Prv-vip3Aa16) and ‎BUPM106 (pHT-spo-Prv-vip3Aa16) strains were toxic and ‎caused 30 % of mortality after 5 days.‎

Mots clés

Vip3;‎ ‎ Vegetative promotor;‎ B. thuringiensis; ‎ E. kuehniella.‎ ‎ ‎

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